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产品简介
新开源super-magneto beads是一种基于SPRI 顺磁微珠技术的DNA纯化与大小分选产品，兼容当前所有公司建库试剂盒，与目前广泛使用的Beckman公司 AMPure XP Beads以及诺唯赞DNA Clean Beads使用方式几乎完全一致，可以无缝替换。此款磁珠产品既可以手工操作，也可以配合自动化工作平台以96孔或384孔板高通量操作，有效提升您的效率，节省成本！
存储与运输
保存需2-8℃，运输建议2-8℃，也可以短时间常温运输。
操作流程细节
核酸纯化：回收体系中所有核酸产物
1. 将磁珠从4℃冰箱取出，震荡混匀，放置止室温备用。
2. 根据反应液体积，取其体积1.8倍的磁珠，与反应液吹打混匀静置10分钟，注意不要产生气泡。
3. 将反应液上磁架，静置5-10分钟，弃去上清,期间配制70%的乙醇缓冲液。
4. 将磁珠继续放置磁架上，在磁珠的另外一侧，轻轻沿管壁加入800ul 70%乙醇，去上清，重复以上操作2-3次。
5. 最后一次将上清尽量去除干净，静置5分钟晾干（观察磁珠无明显发亮的水渍即可，晾干太久磁珠会出现龟裂，影响回收效率）。
6. 使用合适体积的无核酸酶水，用枪吹散磁珠，静置5分钟。
7. 上磁架3-5分钟，吸取上清即为纯化的核酸样品。
DNA文库大小分选:选择性回收不同大小片段产物
分选磁珠的作用原理是基于一种固相载体可逆化固定（SPRI）的分离纯化方法。加入磁珠体积的不同，可吸附DNA的大小也不同。本公司super magneto beads对不同片段大小的磁珠的吸附效果如下表1所示。
表一： super-magneto DNA beads加入比例对应的吸附大小
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magneto DNA beads体积/DNA溶液体积 |
0.6 |
0.7 |
0.8 |
0.9 |
1 |
1.2 |
1.5 |
1.8 |
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平均DNA长度分选范围（bp） |
500 |
400 |
300 |
200 |
175 |
100 |
75 |
75 |
通常情况下DNA不同大小片段的分选一般采用两轮纯化的策略进行，但具体情况可以根据客户需求进行，常用分选不同文库大小片段所需要的磁珠体积推荐如下表2所示：
表2:两轮纯化法回收DNA推荐比例
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第一轮体积比（beads: DNA） |
0.45 |
0.5 |
0.55 |
0.6 |
0.7 |
0.8 |
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第二轮体积比（beads: DNA） |
0.15 |
0.15 |
0.15 |
0.2 |
0.2 |
0.2 |
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分选文库范围(bp) |
600-800 |
500-700 |
400-600 |
300-500 |
200-400 |
175-400 |
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分选文库平均大小(bp) |
700 |
600 |
500 |
400 |
350 |
300 |
文库大小分选操作流程：我们以回收300-500 bp大小的文库为例，简述片段分选流程
1. 取相当于PCR反应液体积0.6倍的磁珠，吹打混匀静置10分钟，上磁架，静置10分钟，转移上清至新的1.5 ml管。此部分0.6倍磁珠将500以上磁珠吸附，上清中留下500bp范围以下的磁珠。
2. 取相当于PCR反应液体积0.2倍的磁珠与上一步上清混匀，吹打混匀静置10分钟，上磁架，静置10分钟，弃去上清。此部分相当于0.8倍以上磁珠，将300bp以上片段吸附到磁珠上，将小的引物二聚体或者小片段遗留到上清中。
3. 用新配70%（v/v）乙醇500 μl洗涤磁珠三次，每次静置1分钟。
4. 吸干乙醇，室温干燥，加入适当体积无核酸酶水，将1.5 ml管取下磁架，吹打均匀，静置5分钟，装上磁架，静置5分钟。
5. 将上清吸至新的1.5 ml管，即为纯化并选择片段大小后的DNA双链溶液。-20℃保存。
可能出现问题与解决方案
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问题 |
回收核酸效率偏低 |
回收核酸OD值异常 |
回收片段大小异常 |
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原因以及解决方案 |
1. 磁珠与回收液混合不均匀，增加吹打次数，混匀30次以上 2. 磁珠混合溶液出现较多气泡，影响回收效率，吹打混匀时减少气泡产生 3. 磁珠晾干的时间过久，磁珠过干，影响了洗脱效率。根据观察磁珠表面水渍情况，缩短晾干时间 |
1. 最后一次洗涤磁珠时，上清去除不干净，可以用小抢尽量去除干净 2. 磁珠洗涤不充分，加入70%乙醇后,增加放置时间或者轻轻晃动磁珠，充分洗涤 |
1. 加入磁珠的体积与实际回收液体体积之间存在偏差，super-maneto分选吸附的效果敏感，而通常PCR体系反应完会有变动，需要用抢测量体积后再根据溶液体积加入磁珠，保证体积的准确性 2. 加入磁珠体积较小而回收片段浓度较大时，文库中片段超出了磁珠吸附饱和度，造成偏差，建议通过去除磁珠上清，浓缩磁珠的方式解决 |
